Dra. N. Brandan

Dra. Ma. Fernanda Aguirre Ojea

Dr. Alberto Luponio

Aquino Esperanza José A.


INTRODUCCION

Los Linfocitos B son un tipo celular que cumple múltiples funciones en el mantenimiento de la inmunidad y ante la   reexposición de noxas . Los linfocitos B se originan y maduran en medula ósea   pero una vez que hayan completado estos cambios se ubican en los ganglios linfáticos, donde se activan en presencia de un agente extraño, con la ayuda de otro tipo celular, los Linfocitos T CD4 + o Linfocitos T helper; aunque bajo ciertas circunstancias pueden hacerlo en ausencia de estos. Las células B durante su maduración expresan diferentes moléculas de superficie que son útiles para su identificación y   conocimiento de su capacidad funcional. Este trabajo busca ser una guía útil para el conocimiento del origen, maduración y activación de los Linfocitos B.

MADURACION

La maduración linfocitaria , son los procesos y cambios irreversibles con el fin de obtener linfocitos funcionalmente activos a partir de una célula madre pluripontencial.

Génesis   de los Linfocitos   B

Fig.1

En el hígado fetal y en la médula ósea, después del nacimiento existe una célula llamada “célula madre hematopoyética pluripotencial” (CMHP), de las cuales derivan todas las células de la sangre. Un grupo de estas CMHP se encuentran en estado quiciente (G0) , para mantener así un número constante, aunque los mismos descienden con la edad. Sin embargo la mayoría se diferencia a “células madres comprometidas”,   estas son células que ya no pueden generar cualquier tipo celular, sino un grupo en especial, por eso se la denomina comprometidas. De esta manera tenemos células comprometidas que originan Eritrocitos, otras granulocitos y las “células madres linfoides” (CML)    que solamente pueden   originar linfocitos T y B. (Fig. 1)

La proliferación y diferenciacion de las células madres comprometidas están controladas por proteínas llamadas “inductores de proliferación”,   tales como los Factores de Crecimiento para las Celulas Pluripotente (Stem Cell Factor),Granulocito-Macrofago e IL3.

Los acontecimientos principales en la maduración son:

1. Reordenamiento y expresión de genes Ig

El linfocito B maduro, expresa en su membrana Ig específica (receptor)   para reconocer un antígeno (Ag)   en particular, estos linfocitos B maduros que tienen el mismo receptor para el mismo Ag se lo denomina “clon”. Un adulto normal presenta entre 10 9 y 10 15 colonias de linfocitos B, por lo tanto se deducen que existen 10 9 y 10 15 Ig con distinta afinidad.   Como las Ig son proteínas, cabe pensar que existen millones de genes para codificar semejante cantidad de moléculas distintas. Si esto fuese cierto la mayor parte de nuestro genoma estaría destinado a producir exclusivamente Ig. Ello no es así, la capacidad de cada sujeto de generar esta extraordinaria diversidad de Ig ha evolucionado de tal forma que no se requiere un número igualmente elevado de genes codificantes.

La explicación de esto , es un proceso llamado “Recombinación somática”,   que se lleva a cabo por un complejo enzimático cuyo nombre es ”Recombinasas V(D)J” en la médula ósea. La recombinación somática es un proceso por el cual diferentes segmentos de ADN se mezclan al azar para formar un gen, de este modo se explica como unos pocos segmentos   al combinarse de todas las maneras posibles produce dicha cantidad de Ig.

Formación de los genes para el receptos de los Linfocitos B

Recordando el concepto que el receptor de las células B es una Ig, y que las Ig están formadas por dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, cada una de estas poseen una región constante (C) y una variable (V)   dichas regiones están codificadas por un segmento distinto de ADN que al recombinarse forman un gen.

Tres loci independientes y en cromosomas distintos, codifican respectivamente, la cadena ligera k   y la cadena ligera l y todas las cadenas pesas ( m y d )   de las Ig. Estos locus poseen tres tipos de segmentos génicos V, C, J y D, además entre estos segmentos génicos   existen cadenas de ADN de hasta 2000 kilobases que los separan. El reordenamiento de los segmentos V, D, J y C en cada locus sigue un orden determinado. Primero hay una recombinación entre los segmentos D y J (se debe tener en cuenta que existen varios segmentos D y J en cada locus)   los segmentos D se encuentran en posición   5'   respecto al segmento J. La selección de que segmento D se unirá al J es al azar, como consecuencia de esta unión quedarán segmentos de   ADN interpuestos que se eliminarán. Después de esta unión, un segmento V, que esta en posición 5' en relación con el complejo DJ se les une, formando así el complejo VDJ, de igual forma que en la anterior, los segmentos de ADN interpuestos se eliminan. El producto obtenido es un complejo VDJ en posición 5' y separado de este, en dirección 3' se encuentran los segmentos C ( m o d )   y entre ambos hay segmentos de ADN y los J no utilizados. Con esta nueva configuración se produce el transcripto primario. En el procesamiento ARN, por eliminación de intrones, se eliminan los segmentos entre el complejo VDJ y los segmentos C. Como el segmento C m es el que más cerca se encuentra del complejo VDJ, es éste el que se conserva.   Finalmente obtenemos un ARNm que al ser traducido nos origina una cadena pesada m .

La proteína m regula la recombinación somática de dos maneras. Primero si el reordenamiento fue productivo (no siempre lo es), la proteína m inhibe irreversiblemente la recombinación de las cadenas pesadas del otro cromosoma. Esto hace que un Linfocito B exprese en su membrana solo el producto de uno de los alelos heredados; esto se denomina “Exclusión    alélica” y garantiza que cada célula B tenga una especificidad. En caso que ambos alelos se expresen se induce la apoptosis.   

La otra manera de regulación de la proteína m es que al expresarse induce la recombinación somática de las cadenas k y l . Las cadenas livianas ya sean   k o l se originan de igual manera , a diferencia que no existe segmento D, por lo tanto primero se forma el complejo VJ   al que le luego se le añade el complejo C (en este caso el segmento C es k o   l   y no m o d ).

Como este proceso ocurre en la médula ósea en pacientes con transplante , se observa una inmunodeficiencia de Linfocitos B (Linfocito T también)   que se debe a una disminución a la recombinación   somática,   en especial en los segmentos V   de las cadenas pesadas. Esta inmunodeficiencia se compensa al año de transplante pero la reconstitución completa de la inmunidad por células B tarda varios años.

Este complejo proceso   de diferenciación, que incluye expresión y supresión de algunos genes esta controlado por “factores de crecimiento” , la IL7 es un inductor que potencia este fenómeno   de dos a cinco veces. Inclusive el efecto de la IL7 se ve fuertemente aumentado por la IL3

2. Proliferación celular

Durante la maduración el Linfocito pasa por diversos estadios desde la CML   hasta el Linfocito B maduro, esta diferenciación se caracteriza por la expresión de genes y receptores. La CML comienza expresando moléculas propias de la estirpe B como CD19 y CD10, cuando esto ocurre se lo denomina “célula pro-B“, que no expresa ningún gen de Ig. La “célula pre-B”   representa el siguiente estadio de desarrollo,   esta es la primer célula de la serie que expresa un gen de Ig, la cadena pesada m . Esta proteína es principalmente citoplasmática, pero en bajos niveles se lo encuentra en la membrana unida con cadenas ligeras sustitutivas   que reemplazan estructural pero no funcionalmente a las cadenas k o l   (no sintetizadas aún) este complejo recibe el nombre de “receptor de la célula pre-B”. Hay que destacar que todavía no puede reconocer ni responder   a los Ag, porque para esto hace falta que las Ig de membranas esten completa, es decir con las cadenas ligeras y pesadas.

En la siguiente fase de la maduración se expresan las cadenas k o l (por inducción de la cadena pesada m ), las que se unen a la cadena   pesada m   y forma la IgM, expresándose ahora en la membrana como receptor específico junto con las moléculas asociadas como Ig a e Ig b , este nuevo estadio se llama “Linfocito B inmaduro” . Mas allá que esta célula pueda reconocer un Ag específico no puede proliferar ni diferenciarse frente a éste.

Fig.2

Tras el estadio de expresión de IgM en la membrana encontramos el último, en donde la célula pasa a llamarse “Linfocito B maduro”. Este coexpresa las   cadenas pesadas m y d junto con k o l , por lo tanto produce IgM e IgD de membrana, ambas Ig poseen la misma región V (variable), cambiando su cadena pesada;   es por esto que ambas son   específicas para el mismo Ag. La coexpresión de IgM e IgD   se acompaña con la competencia funcional de la célula. (Fig. 2)

3. Selección del repertorio      

Durante la maduración los marcadores de Linfocitos B establecen interacciones con células y Ag propios,   si las células B reaccionan    frente a estos Ag   se inicia la apoptosis.   Este fenómeno de eliminación de células que no reconocen los Ag propios y el mantenimiento de las que sí lo hacen, se llama “selección positiva” . Esto es muy importante   porque   de ello depende que estos Linfocitos no completen su maduración, de otra manera serían perjudiciales para el organismo, debido a que las células encargadas de las defensas no distinguen lo propio de lo extraño reaccionando de esta forma contra su propio cuerpo. Esto es el fundamento de las enfermedades autoinmunes.

Además de la apoptosis (como mecanismo de eliminación de células autoreactivas)   existe otro proceso : la “edición del receptor”.   Se podría considerar como una segunda oportunidad, porque aquí se induce una nueva recombinación VJ   de la cadena ligera, lo que permite a la célula expresar una nueva Ig no reactiva, para continuar de este   modo   con su maduración.

ACTIVACION

Los Linfocitos B participan en la “ Inmunidad humoral”, esta se caracteriza por la producción y liberación de anticuerpos (Ac) con el fin de destruir los Ag por los cuales fueron creados. El rol principal de las células B, en esta respuesta es la producción de una amplia gama de Ac y su diferenciación a células de memoria. Además otras funciones que se comentaran continuación.

Los Ag que inducen la activación de los Linfocitos B pueden ser proteicos, polisacáridos, lípidos etc. De acuerdo a que tipo de Ag estos requerirán la participación de los Linfocitos T helper (LTh). De este modo encontramos que los Ag peptídico necesitan la ayuda de los LTh para poder activar al Linfocito B, a estos se los denomina “Ag T dependientes”, mientras que los Ag no proteicos   no necesitan a los LTh, esta característica les da el nombre de “Ag T independientes”.

Para la comprensión de la activación de los Linfocitos B y un correcto desarrollo del tema dividiremos a este en:

•  Reconocimiento del Ag por los Linfocitos B

•  Mecanismo de activación por Ag T dependientes

•  Mecanismo de activación por Ag T independientes

•  diferenciación a células Plasmática o productora de Ac

•  Diferenciación a células de memoria

Fig.3

1.Reconocimiento de los Ag por los Linfocitos B

El reconocimiento se lleva a cabo por la unión del Ag a una molécula de Ig de membrana (IgM o IgD) especifica, que son el receptor de los Linfocitos B.

Citoplasma

Si bien el receptor para el Ag son moléculas de IgM e IgD, estas no pueden enviar señales al interior de la célula, es por esto que junto a ellas se encuentran otro tipo de Ig llamadas Ig a e Ig b . Este complejo se denomina “Complejo receptor del Linfocito B”.(Fig. 3)

Fig.4

Este complejo receptor después de la unión al Ag. Inicia una cascada de fosforilaciones con el fin de activar a factores de transcripción para inducir la expresión de nuevos genes necesarios para la activación del Linfocito B.(Fig. 4)

Una vez que se reconoció al Ag y se expresaron los genes necesarios, las células B se preparan para la proliferación y diferenciación por medio de varios acontecimientos: 1) las células que se encontraban en Go del ciclo celular, pasan a G1. 2) Supervivencia de las células por expresión de genes antiapoptoticos. 3) Expresión   de las moléculas de clase II del “Complejo principal de histocompatibilidad” (MHCII) y coestimuladores, para activar a los LTh. 4)Aumento de receptores para citoquinas.

El primer suceso que ocurre en la activación, ya sea por Ag T dependientes o Ag T independientes, es la “Expansión clonal”. Este es un aumento del numero de células por mitosis, luego cada una tendrá un destino distinto.

2. Mecanismo de activación por Ag T dependientes

Los Ag proteicos no pueden inducir por si solos la activación de los Linfocitos B, si no que requieren la estimulación de los Linfocitos CD4 + (LTh).

Fig. 5

Las células B especificas para el Ag, lo unen a su receptor, lo internalizan y lo procesan en vesículas endosomicas. Estas proteínas endocitadas son degradadas por enzimas presentes en los endosomas y lisosomas para generar pequeños péptido (10 a 30 AA) que podrán unirse a las moléculas del MHCII. Estas son sintetizadas en el Retículo endoplasmico rugoso y luego son transportadas al endosoma donde se unen a los péptido. Luego este complejo péptido-MHCII se expresa en la membrana y junto con estos se expresan otras proteínas llamadas “coestimuladores”. Finalmente en la membrana de Linfocito B se encuentran el péptido unido a la molécula del MHCII y sus coestimuladores, cuyo fin es poder “presentar” el Ag a los LTh. (Fig. 5.) Por esta función a las células B se las incluye dentro del grupo de “células presentadoras de Ag” (APC).

Los LTH presentan en su membrana receptores para el MHCII y ligándos para los coestimuladores, que cuando interactúan con estos activan a los LTh. Una vez activados estos secretan citoquinas para estimular la proliferación y diferenciación del Linfocito B. Las citoquinas no son especificas para cada Ag, aunque hayan sido secretadas por la activación de un LTh especifico.Las citoquinas desempeñan dos funciones principales: 1) Estimulan la proliferación y diferenciación de los Linfocitos B. 2) Determinan que tipo de Ig se producirá por la activación de las células B.

4. Mecanismo de activación por Ag T independientes.

Si bien a la mayoría de los Ag a los que nos vemos sometidos son Ag proteicos, existe otro tipo que pueden ser: polisacáridos, glucopeptidos y ácidos nucleicos. Estos Ag no son internalizados, si no que ejercen su acción por señalizaciones intracelulares producidas por el receptor del Linfocito B.

Generalmente la respuesta producida por este tipo de Ag, se compone de Ac de escasa afinidad y un repertorio de células de memoria bajo. La importancia practica de este tipo de reacción, es que muchos Ag de las paredes bacterianas son polisacáridos y este es el mecanismo principal de la activación de los Linfocitos B en la inmunidad frente a las infecciones bacterianas.

5. Diferenciación a célula plasmática o productora de anticuerpos.

Parte de las células B que han proliferado en respuesta al Ag y a la colaboración de los LTh se diferencia a células plasmáticas. En consecuencia a las citoquinas liberadas por los LTh (IL2, IL4. IL6) y a los coestimuladores, los Linfocitos B llevan a cabo dos procesos: a) El cambio de isotipo (clase) de cadena pesada. b) La maduración de la afinidad.

a). Cambio de isotipo de cadena pesada

Hasta el momento mencionamos solo dos tipos de Ig, las IgM e IgD, estas poseen dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, el isotipo (clase) de cadena pesada de la IgM es m   y de la IgD es d. En este momento el Linfocito solo puede expresar esta Ig, pero como mencionamos antes, poseen los segmentos génicos para todas la Ig (IgA1, IgA2, IgM, IgD, IgE, IgD, IgG1, IgG2, IgG3). Una ves que el Linfocito es activado puede cambiar de isotipo de cadena pesada m o d por cualquier otra ( a , g , e ), lo que determinara el tipo de Ig que se producirá. Hay que aclarar dos cosas. Uno, lo que se cambia es el isotipo de la cadena pesada y no el segmento variable, por lo tanto cambia el tipo de Ig pero no la afinidad. También se debe entender que el tipo de Ig a producir depende de la estimulación del LTh.

Básicamente este es un proceso sencillo de reordenamiento de los genes. Si recordamos el complejo VDJ se encuentra en posición 5' respecto al segmento C m (C m es el segmento que mas cerca se encuentra del complejo VDJ, pero en dirección 3' están los otros C d , C a , C g , y C e ). Lo que ocurre es lo siguiente, el complejo VDJ se combina con otro segmento C y se elimina el ADN intercalado.

b) Maduración de la afinidad.

Este es un proceso por el cual las Ig aumentan su afinidad por un Ag determinado. Esta mecanismo va seguido de la supervivencia de las células B ,que pueden hacerlo y   las que no sufren apoptosis. Este cambio se produce solo frente a los Ag proteicos.Las recombinaciones somáticas de este fenómeno no se conocen bien aun.

6 .Diferenciación a células de memoria.

El otro camino que pueden seguir las células B activadas es evolucionar a “células de memoria “. Este tipo celular adquiere la capacidad de sobrevivir largos periodos de tiempo (mas de 10 años).

Estas células ya han madurado su afinidad y cambiado los isotipos de cadena pesada, pero no secretan Ig, el fin de ellas es crear una “memoria inmunológica” que sea capas de reconocer mas rápido y eficazmente al mismo Ag en una reexposición. (Fig. 6)

Resumen

Los Linfocitos B son células que participan principalmente en la inmunidad humoral y se originan de las CMHP, de la cual derivan todas las células de la sangre.

Pasan por un estadio de maduración en la medula ósea controlado por factores de crecimiento y proliferación, donde sufren un reordenamiento de sus genes y la expresión de diferentes moléculas en su membrana los que son utilizados para distinguir sus estadios.

Estas células en presencia de un Ag proteico necesitan la ayudad de los Linfocitos CD4 + (LTh) para su activación. Una vez activados se   produce una expansión clonal y luego se diferencia a células de memoria o productoras de Ac.

También pueden ser activados por Ag polisacáridos, Glucopedtidicos, Ácidos nucleicos; en este caso los Ac producidos serán de menor afinidad y las células de memoria no sobreviven mucho tiempo.

BIBLIOGRAFÍA